sciences de la vie et de la Terre

"D'autres leucocytes, les lymphocytes B, sécrètent dans le sang des molécules nommées anticorps capables de participer à la neutralisation des microorganismes et favorise la phagocytose.

Chaque type d'anticorps est spécifique d'un antigène. Une personne est dite séropositive pour un anticorps déterminé lorsqu'elle présente cet anticorps dans son sang."

Cette manipulation permet de démontrer qu'un individu malade produit des "éléments" (les anticorps),qui circulent dans le sang, et qui réagissent en présence des antigènes du microorganisme qui l'infectent. Elle permet aussi d'illustrer la notion de spécificité anticorps-antigène et peut être l'occasion d'amorcer une réflexion sur  les raisons moléculaires de cette spécificité. (même si cet aspect n'est pas exigible au programme).

C'est une méthode d'immunodiffusion sur gel : les solutions déposées dans les puits creusés dans le gel diffusent de façon homogène  dans  toutes  les  directions  autour  du  puits.  Deux  auréoles  de  diffusion  peuvent  donc  entrer  en  contact lorsqu'elles  ont  suffisamment  progressé.  Cette  zone  de  contact  reste  invisible  s'il  n'y  a  pas  de  réaction  entre  les  deux solutions.  Quand  il  y  a  réaction  entre  les  solutions,  il  se  forme  un  arc  de  précipitation  visible  à  l'œil  nu.  Celui-ci  est  dû  à l'interaction  entre  de  nombreux  anticorps  et  les  antigènes  spécifiques.

On cherche à identifier, parmi  4  personnes, un individu ayant été en contact avec la méningite et en particulier la Méningite à méningocoques (Neisseria meningitidis).
L'individu ayant été en contact avec le méningocoque a  produit des anticorps  capables de réagir face aux antigènes de cette bactérie.

La spécificité d'un anticorps étant liée à sa capacité de liaison avec l'antigène, le test d'immunodiffusion, ou test d'Ouchterlony, permet la mise en évidence de cette liaison antigène-anticorps et donc de repérer l'individu séropositif au méningocoque.

Pour ce test :

-Préparer une solution de soude à 0, 4 g pour 10 ml d'eau distillée (simulation du sérum qui va réagir).(prête d'avance pour les élèves)
Remarque : L'utilisation par les élèves de soude doit être soumis à précaution : le rappel des règles de sécurité à adopter lors de manipulations s'impose.

-Préparer une solution de sulfate de zinc à 0, 8  g pour 10 ml d'eau distillée(ou 0,6g pour 10ml) (simulation des antigènes de micro-organismes)(prête d'avance aussi).Si la solution de ZnSO4 est un peu blanchâtre, la laisser reposer et n'utiliser  que le mélange limpide.


- Préparer un gel d'Agar à couler dans une boîte de Pétri pour test d'Ouchterlony
Peser 1, 5 g d'agar-agar et le verser dans 100 ml d'eau distillée froide.(on réalise environ 15 boîtes).  Faire chauffer doucement en remuant bien tout le temps jusqu'à apparition de bulles mais ne pas faire bouillir  (le mélange devient limpide). Couler ensuite l'agar-agar chaud sur une hauteur de 3  mm environ dans les bouchons, petits pots ou les boîtes de Pétri.(toute la gélose est utilisée). Laisser refroidir jusqu'à la prise de l'agar-agar.(Les puits s'évident mieux si on passe les boîtes,quelques minutes,  au réfrigérateur avant leur utilisation ).





2- Exemple du matériel proposé aux élèves